En el presente capítulo se describen los métodos de análisis y los requisitos específicos para los colorantes sintéticos utilizados en la formulación de medicamentos. Además de los colorantes descritos en este capítulo, pueden emplearse aquellos colorantes naturales autorizados por el Código Alimentario Nacional.

Se pueden emplear sustancias agregadas exclusivamente para dar color a las preparaciones oficiales, excepto en aquellas destinadas a la administración parenteral u oftálmica. Cabe aclarar que las sustancias incorporadas a la formulación deben ser apropiadas en todos los otros aspectos (ver Consideraciones generales), como por ej., no tener influencia adversa sobre la eficacia terapéutica de los principios activos y no interferir con los ensayos y valoraciones, entre otros. Es recomendable no agregar colorantes a las preparaciones indicadas para tratamientos prolongados. Los medicamentos de uso oral que contengan tartrazina o eritrosina deben incluir en su prospecto una leyenda con el siguiente texto: "Este medicamento contiene tartrazina como colorante" o "Este medicamento contiene eritrosina como colorante", respectivamente.

Identificación cromatográfica - (ver 100. Cromatografía).

[NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico.]

Sistema A - Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de n-butanol, etanol, agua y amoníaco (50:25:25:10). Sembrar las soluciones sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con celulosa de 0,1 mm de espesor. Desarrollar los cromatogramas en una cámara sin revestimiento interno y sin saturar.

Sistema B - Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de metiletilcetona, acetona, agua y amoníaco (140:60:60:1). Sembrar las soluciones sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con gel de sílice 60 de 0,2 mm de espesor. Desarrollar los cromatogramas en una cámara revestida internamente con papel de filtro y saturada durante 2 horas.

Sistema C - Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de acetonitrilo, alcohol isoamílico, agua, amoníaco y metiletilcetona (50:50:15:10:5). Sembrar las soluciones sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con gel de sílice 60 de 0,2 mm de espesor. Desarrollar los cromatogramas en una cámara sin revestimiento interno y saturada durante 20 minutos. Desarrollar la placa al menos dos veces.

Procedimiento - Preparar una Solución muestra y una Solución estándar que contengan aproximadamente 1 mg por ml en metanol. Aplicar por separado 10 ml de cada una de las soluciones y desarrollar los cromatograrnas.

Identificación espectrofotométrica - (ver 470. Espectrofotometría ultravioleta y visible).

[NOTA: proteger las soluciones de la luz. Realizar rápidamente los procedimientos bajo luz tenue, o empleando materiales de vidrio inactínico.] Todos los ensayos se realizan en solución de acetato de amonio 0,04 M (3,083 g por litro). Efectuar un barrido espectral entre 210 y 750 nm con un espectrofotómetro apropiado y empleando una solución de acetato de amonio 0,04 M como blanco.

Pérdida por secado <680> - Transferir aproximadamente 2,0 g de muestra, exactamente pesados, a un recipiente apropiado. Secar a 135°C hasta peso constante. Calcular la pérdida de peso, en porcentaje, respecto del peso de la muestra.

Determinación de cloruro - Transferir aproximadamente 1,0 g de colorante, exactamente pesado, a un recipiente apropiado. Disolver en 100 ml de agua y acidificar con 5 ml de ácido nítrico 1,5 N. Determinar el contenido de cloruro de la solución por titulación, calcular el punto final potenciométricamente empleando un electrodo de plata-cloruro de plata y un electrodo de referencia de vidrio (ver 780. Volumetría). Cada mililitro de nitrato de plata 0,1 N (SV) equivale a 0,00585 g de cloruro de sodio.

Determinación de sulfato - Transferir aproximadamente 5,0 g del colorante, exactamente pesados, a un erlenmeyer de 250 ml y disolver en 100 ml de agua calentando en un baño de agua. Agregar 35 g de cloruro de sodio libre de sulfato, tapar el erlenmeyer y agitar por rotación a intervalos frecuentes durante 1 hora. Enfriar, transferir con solución saturada de cloruro de sodio a un matraz aforado de 250 ml y llevar a volumen con solución saturada de cloruro de sodio. Agitar el matraz y filtrar la solución a través de un papel de filtro seco. Transferir cuantitativamente 100 ml del filtrado a un vaso de precipitados de 500 ml, diluir a 300 ml con agua y acidificar con ácido clorhídrico agregando 1 ml de exceso. Calentar la solución a ebullición y agregar, gota a gota y con agitación, un exceso de cloruro de bario 0,125 M. Dejar la mezcla en reposo durante 4 horas sobre una placa calefactora o durante toda la noche a temperatura ambiente y luego calentar a 80°C. Dejar sedimentar el precipitado y filtrar. Lavar el precipitado con agua caliente hasta que los lavados den negativa la reacción para Cloruro (ver 410. Ensayos generales de identificación). Colocar el precipitado en un crisol, previamente pesado, y someter a calcinación hasta peso constante. Realizar una determinación con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Expresar el resultado como porcentaje en peso de sulfato de sodio.

Materia insoluble en agua - Transferir aproximadamente 4,0 g de muestra, exactamente pesados a un recipiente apropiado. Disolver con agitación en 200 ml de agua caliente (entre 80 y 90°C) y dejar enfriar a temperatura ambiente. Filtrar a través de un filtro de vidrio sinterizado de porosidad fina; previamente pesado, lavar con agua fría hasta que las aguas de lavado sean incoloras. Secar a 135 °C hasta peso constante. Calcular el porcentaje de materia insoluble en agua.

Extracto etéreo - Emplear un aparato de extracción tipo soxhlet. Colocar un pequeño trozo de alambre de cobre suspendido en el refrigerante y aproximadamente 0,5 g del mismo alambre en el balón. Transferir aproximadamente 2,0 g del colorante, exactamente pesados, al aparato de extracción y extraer 150 ml de éter etílico o éter isopropílico durante 5 horas. Concentrar el extracto sobre un baño de vapor hasta aproximadamente 5 ml. Transferir a un cristalizador previamente pesado, evaporar en un baño de agua y luego secar a 105°C hasta peso constante. El aumento de peso expresado como porcentaje con respecto a la muestra tomada corresponde al extracto etéreo.

Contenido de colorante -

Titulación con tricloruro de titanio -

METODO I - Preparar una solución al 1,0 de la muestra en agua y colocar un volumen equivalente a 20 ml de tricloruro de titanio en un erlenmeyer de boca ancha de 500 ml. Agregar 15 g de citrato de sodio y agua hasta obtener un volumen entre 150 y 200 ml. Calentar a ebullición y titular con tricloruro de titanio 0,1 N (SV).

METODO II - Preparar una solución al 0,5% de la muestra en alcohol. Proceder según se indica en Método I pero sustituyendo el agua por alcohol al 50%.

METODO III - Proceder según se indica en Método I pero sustituyendo el citrato de sodio por 15 g de tartrato ácido de sodio.

[NOTA: para muchos colorantes el punto final de la titulación con tricloruro de titanio está indicado por una marcada decoloración. Para otros, sin embargo, el cambio es tan gradual que se requiere un exceso de tricloruro de titanio (no más de 0,3 ml de solución 0,1 N) y se debe emplear una solución patrón conveniente de algún otro colorante, haciendo una titulación por retorno (en general se emplea el azul de metileno). En otros casos es mejor emplear un indicador que se reduzca luego que el colorante haya reaccionado con el tricloruro de titanio. Se obtienen buenos resultados empleando una cantidad conocida de verde brillante como indicador en la titulación de tartatrazina].

Valoración espectrofotométrica - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico]. Preparar la Solución muestra y una Solución estándar en acetato de amonio 0,04 M, de modo que la concentración sea la indicada para cada colorante. Determinar la absorbancia de ambas soluciones a la longitud de onda especificada, con un espectrofotómetro apropiado, empleando una solución de acetato de amonio 0,04 M como blanco. El porcentaje de colorante total calculado sobre la muestra no debe ser inferior al porcentaje especificado para cada colorante.

AMARANTO (CI 16185)

Definición - El Amaranto es esencialmente la sal trisódica del ácido 1-(4-sulfo-1,1naftilazo)-2-naftol- 3,6-disulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y/o sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color pardo rojizo a pardo rojizo oscuro. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta fluorescencia apreciable. Soluble en agua.

Identificación cromatogrática - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,39.

Sislema B: R_f aproximadanente 0,24.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta un máximo a 522 nm y en el ultravioleta presenta máximos a 218 y 331 nm, un mínimo a 311 nm y otro mínimo entre 359 y 389 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 10 ppm.

Arsénico <540> - No más de 3 ppm.

Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico.]

Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de metiletilcetona, acetona y agua (54:23:23).

Preparar una solución muestra que contenga 20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml, correspondientes al 0,25; 0,5 y 1% respectivamente, empleando en todos los casos agua como solvente.

Aplicar por separado 3 ml de cada una de las soluciones sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con celulosa para cromatografía de aproximadamente 0,1 mm de espesor y desarrollar los cromatogramas en una cámara revestida internamente con papel de filtro y saturada durante 2 horas.

Realizar la estimación visual de las manchas secundarias de la muestra contra las manchas de las soluciones diluidas. Ninguna de las manchas secundarias debe ser mayor a 1% y la suma de todas ellas no debe ser mayor a 3%.

Contenido de colorante total -

Titulación con TiCI₃ - Método I. Cada mililitro de TiCl₃ 0,1 N equivale a 0,01511 g de C₂₀H₁₁N₂O₁₀S₃Na₃. Contiene no menos de 85,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 522 nm. Contiene no menos de 85,0%.

AMARILLO DE QUINOLINA (Cl 47005) C₁₈H₉NO₈S₂Na₂ (componente principal)

PM: 477,4 (derivado disulfónico) y 375,3 (derivado monosulfónlco)

Definición - El Amarillo de quinolina es esencialmente una mezcla de sales sódicas de disulfonatos (principalmente), monosulfonatos y trisulfonatos de quinoftalona y quinolilinedandiona, junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color amarillo verdoso. Expuesto a la luz ultravioleta presenta fluorescencia amarillo anaranjada viva. Moderadamente soluble en agua.

Identificación cromatográfica- (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,44.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,37.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,015 mg por ml en el visible presenta un máximo a 414 nm y en el ultravioleta presenta máximos a 225, 236 (muy pequeño) y 289 nm y mínimos a 233 (muy pequeño), 269 y 336 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 30%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Contenido de colorante total -

Valoración espectrofotométrica -

Concentración :0,015 mg por ml. Determinar la absorbancia a 414 nm. Contiene no menos de 70,0%.

AMARILLO OCASO FCF (Cl 15985)

Definición - El Amarillo ocaso es esencialmente la sal disódica del ácido 1-p-sulfenilazo-2-naftol-6- sulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color anaranjado rojizo. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta fluorescencia apreciable. Soluble en agua.

Identificación cromatográfica - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,61.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,37.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta un máximo a 482 nm y en el ultravioleta presenta máximos a 235 y 314 nm y mínimos a 288 y 347 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico].

Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de alcohol isoamílico, acetona, agua y amoníaco (65:50:20:5).

Preparar una solución muestra que contenga 20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de 0,1; 0,2 y 0,5 rng por ml correspondientes al 0,5; 1 y 2,5% respectivamente, empleando en todos los casos agua como solvente.

Aplicar por separado 3 ml de cada una de las soluciones sobre una placa para cromatografia en capa delgada recubierta con gel de sílice 60 para cromatografía de 0,2 mm de espesor. Desarrollar los cromatogramas en una cámara sin saturación.

Comparar visualmente las manchas secundarias de la muestra con las manchas de las soluciones diluidas, ninguna de las manchas secundarias debe ser mayor a 2% y la suma de todas ellas no debe ser mayor a 5%.

Contenido de colorante total -

Titulación con TíCl₃ - Método I. Cada mililitro de TiCI3 0,1 N equivale a 0,01132 g de C₁₀H₁₀N₂O₇S₂Na₂. Contiene no menos de 85,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 482 nm. Contiene no menos de 85,0%.

AZUL BRILLANTE FCF (CI 42090)

Definición - El Azul brillante FCF es esencialmente la Sal disódica de a-[4-(N-etil-3-sul fonatobencilamino)- ciclohexa-2,5-dienililideno]-tolueno-2-sulfonato y sus isómeros y colorantes subsidiarios, junto con cloruro y/o sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color violeta oscuro. Expuesto a la luz ultravioleta presenta color azul oscuro.

Soluble en agua. -

ldentiticación cromatográfica - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,72.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,31.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,006 mg por ml en el visible presenta máximos a 409 y 630 nm y un mínimo a 456 nm; y en el ultravioleta presenta un máximo 308 nm y mínimos a 270 y 348 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico].

Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de acetonitrilo, alcohol isoamílico, metiletilcetona,amoníaco y agua (50:50:15:5:5).

Preparar una solución muestra que contenga 20 mg por ml y una solución diluida que corresponda al 6% de la muestra (1,2 mg por ml) que será empleada como estándar, empleando en ambos casos metanol como solvente.

Aplicar en banda 50 ml de la solución muestra sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con gel sílice 60 para cromatografía de 0,2 mm de espesor, reservando en la placa el espacio correspondiente a dos siembras para una posterior aplicación del estándar y realización del blanco. Desarrollar los cromatogramas en una cámara sin revestimiento interno y saturada durante 20 minutos. Retirar la placa de la cámara, secarla al reparo de la luz y repetir el desarrollo empleando la misma fase móvil.

Secar la placa al reparo de la luz y aplicar en banda 50 ml de la solución estándar.

En tres erlenmeyer de 50 ml con tapón de vidrio esmerilado colocar el raspado de las manchas secundarias de la muestra (excluyendo la mancha correspondiente al origen de siembra y la mancha inmediata superior a la principal), el raspado del estándar y un blanco constituido por el raspado de un sector limpio del cromatograma. Las tres áreas raspadas deben ser aproximadamente iguales.

A cada erlenmeyer agregar 6 ml de una mezcla de acetona y agua (1:1) y agitar durante 2 ó 3 minutos, luego agregar 18 ml de una solución bicarbonato de sodio 0,05 M y volver a agitar.

Recolectar cada solución con una jeringa de 50 ml, realizar una filtración por medio de un cabezal de filtración con membrana de celulosa regenerada de 13 mm de diámetro y 0,45 mm de porosidad.

Determinar la absorbancia de la solución muestra y la solución estándar a 630 nm, empleando la solución blanco como referencia. Calcular el porcentaje total de colorantes subsidiarios por la fórmula siguiente:

en la cual A_M es la absorbancia de la solución muestra y A_E la absorbancia de la solución estándar. El porcentaje total de colorantes subsidiarios no debe ser mayor a 6%.

Contenido de colorante total -

Titulación con TiCI₃ - Método III. Cada mililitro de TiCl₃ 0,1 N equivale a 0,03964 g de C₃₇H₃₄N₂O₉S₃Na₂. Contiene no menos de 85,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,006 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 630 nm. Contiene no menos de 85,0%.

AZUL PATENTE V (Cl 42051)

Definición - Es esencialmente la sal cálcica del ácido disulfónico del anhídrido hidroxitetrácetildiamino trifenil-carbinol y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y/o sulfato de sodio y/o cloruro de calcio y/o sulfato de calcio.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos color azul violeta, oscuro. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta fluorescencia apreciable. Poco soluble en agua.

Identificación cromatográfica - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,67.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,39.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,005 mg por ml en el visible presenta máximos a 412 y 638 nm y un mínimo a 455 nm; y en el ultravioleta presenta máximos a 232 y 311 nm, un mínimo entre 254 y 269 nm y otro a 351 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico].

Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de n-butanol, agua, etanol y amoníaco (600:264:135:6).

Preparar una solución muestra que contenga 20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml correspondientes al 0,25; 0,5 y 1% respectivamente, empleando en todos los casos agua como solvente.

Aplicar por separado 3 ml de cada una de las soluciones sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con celulosa para cromatografía de 0,1 mm de espesor y desarrollar los cromatogramas en una cámara revestida internamente con papel de filtro y saturada durante 2 horas.

Realizar la estimación visual de las manchas secundarias de la muestra contra las manchas de las soluciones diluidas, sin tener en cuenta para tal fin la primera mancha de R_f inferior a la mancha principal. Ninguna de las manchas secundarias debe ser mayor a 0,5% y la suma de todas ellas no debe ser mayor a 2%.

Contenido de colorante total -

Titulación con TiCl₃ - Método III. Cada mililitro de TiCI₃ 0,1 N equivale a 0,02898 g de C₅₄H₆₂N₄O₁₄S₄Ca. Contiene no menos de 85,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,005 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 638 nm. Contiene no menos de 85,0%.

ERITROSINA (Cl 45430)

Definición - La Eritrosina es esencialmente la sal dlsódica del ácido 2-(2,4,5,7-tetraiodo-3-oxo-6- oxoxanten-9-il) benzoico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y/o sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color rojo sangre. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta fluorescencia apreciable. Soluble en agua y en alcohol.

Identificación cromatográfica - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,79.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,54.

Identificación espectrofotométrica - (ver, Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,009 mg por ml en el visible presenta un máximo a 527 nm y en el ultravioleta presenta máximos a 262 y 308 nm, un mínimo entre 338 y 383 nm y mínimos a 238 y 289 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No,más de 2 ppm.

lodo - Transferir una cantidad de muestra, exactamente pesada, que contenga el equivalente a 50 mg de iodo, a un vaso de precipitados de 500 ml. Disolver en 2 ml de solución de hidróxido de sodio al 30%, diluir a 100 ml, agregar perlas de vidrio y 15 ml de solución de permanganato de potasio al 7%. Cubrir con un vidrio de reloj y calentar a ebullición durante 5 minutos. Cuando cese la ebullición, agregar cuidadosamente 10 ml de ácido nítrico y hervir durante 5 minutos más. Lavar el vidrio de reloj y las paredes del vaso (puede haber exceso de permanganato de potasio). Agregar rápidamente 5 ml de nitrito de sodio al 10% con agitación. Agregar nitrito de sodio, gota a gota, hasta que la suspensión se aclare, dejando que cada gota reaccione antes de agregar la siguiente. Si cuando la solución se decolora se observan partículas de dióxido de manganeso, no intentar destruirlas sino agregar inmediatamente solución de permanganato de potasio al 1% en porciones de 1 ml hasta que la solución solución se torne rosada. [NOTA: si se requieren más de 2 ml o si aparece una coloración marrón, agregar primero 10 ml de solución diluida de permanganato de potasio y calentar a ebullición. Repetir la adición de nitrito de sodio, gota a gota, y agregar nuevamente solución diluida de permanganato de potasio hasta que la solución se torne rosada]. Filtrar rápidamente con succión a través de una placa de vidrio sinterizado. Lavar la placa con agua. Agregar solución de nitrito de sodio, gota a gota y con agitación, hasta decoloración total. Agregar 5 ml de solución de ácido sulfámico al 10% y lavar las paredes del frasco. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 ó 3 g de ioduro de potasio y titular el iodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N (SV), empleando almidón (SR) como indicador. Realizar una determinación con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mililitro de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 0,002115 g de iodo. Contiene entre 56,8 y 58,5%.

loduro de sodio - Transferir 5 g de muestra a un vaso de precipitados de 400 ml y agregar 150 ml de agua. Calentar a temperatura próxima a la ebullición y agregar 5 ml de ácido fosfórico concentrado. Digerir hasta que el precipitado coagule bien, enfriar a temperatura ambiente, transferir a un matraz aforado de 250 ml y llevar a volumen. Mezclar vigorosamente y filtrar. Descartar los primeros ml del filtrado. Transferir una alícuota de 100 ml del filtrado a un vaso de precipitados de 500 ml, agregar 2,5 ml de solución de hidróxido de sodio al 30% y 15 ml de solución de permanganato de potasio al 7%. Proceder según se indica en Iodo comenzando donde dice "calentar a ebullición durante 5 minutos... ". Cada mililitro de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 0,002498 g de ioduro de sodio. Contiene no más de 0,4%.

Contenido de colorante total -

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,009 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 527 nm. Contiene no menos de 85,0%.

INDIGO CARMIN (CI 73015)

Definición - Es esencialmente una mezcla de la sal disódica del ácido 3,3’-dioxo-2,2’bisindolilideno- 5,5’-disulfónico y la sal disódica del ácido 3,3’-dioxo-2,2’-bisindolilideno-5,7’-disulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y/o sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color azul marino fuerte. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta fluorescencia apreciable. Poco soluble en agua.

Identificación cromatográfica - (ver Identificación cromatográica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,38.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,32.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta un máximo a 611 nm y un mínimo entre 401 y 478 nm; y en el ultravioleta presenta máximos a 252 y 287 nm y mínimos a 231 y 266 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,4%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 10 ppm.

Arsénico <540> - No más de 3 ppm.

Contenido de colorante total -

Titulación con TiCl₃ - Método III. Cada mililitro de TiCl₃ 0,1 N equivale a 0,02332 g de C₁₆H₈N₂O₈S₂Na₂. Contiene no menos de 85,00%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 611 nm. Contiene no menos de 85,0%.

NEGRO BRILLANTE BN (Cl 28440)

Definición - Es esencialmente la sal tetrasódica del ácido 4-acetamido-5-hidroxi-6-7-sulfonato-4-(4- sulfonatofenilazo)-1-naftilazo]-naftaleno-1,7- disulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color negro grisáceo. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta fluorescencia. Poco soluble en agua.

Identificación cromatogrática - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,24.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,28.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta máximos a 414 y 573 nm y un mínimo a 460 nm; y en el ultravioleta presenta un mínimo a 373 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 20%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Contenido de colorante total -

Titulación con. TiCl₃ - Método III. Cada mililitro de TiCI₃ 0,1 N equivale a 0,01086 g de

C₂₈H₁₇N₅O₁₄S₄Na₄. Contiene no menos de 80,0%.

Valoración. espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 573 nm. Contiene no menos de 80,0%.

PUNZO 4R ( Cl 16225)

Definición - El punzó 4R es esencialmente la sal trisódica del ácido 2-hidroxi-1-(4-sulfonato-1- naftilazo)-naftaleno-6,8-disulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color rojo escarlata vivo. Expuesto a la luz ultravioleta presenta fluorescencia escarlata. Moderadamente soluble en agua.

Identificación cromatográfica - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,50.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,30.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta un máximo a 507 nm y en el ultravioleta presenta máximos a 217, 246 y 333 nm y mínimos a 238, 302 y 374 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 20%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Contenido de colorante total -

Titulación con TiCl₃ - Método I. Cada mililitro de TiCl₃ 0,1 N equivale a 0,02511 g de C₂₀H₁₁N₂O₁₀S₃Na₃. Contiene no menos de 80%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima -absorción aproximadamente a 507 nm. Contiene no menos de 80,0%.

ROJO ALLURA AC (Cl 16035)

Definición - El Rojo Allura AC es esencialmente la sal disódica del ácido 2-hidroxi-1-(2-metoxi-5-metil- 4-sulfonato-fenilazo)naftaleno-6-sulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color rojo oscuro. Soluble en agua, insoluble en alcohol.

ldentiticación cromatogrática - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,62.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,36.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta un máximo a 499 nm y en el ultravioleta presenta máximos a 214, 225 y 315 nm y mínimos a 231, 262 y 351 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 10 ppm.

Arsénico <540> - No más de 3 ppm.

Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico.]

Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de alcohol isoamílico, 1,4-dioxano, acetonitrilo, acetato de etilo, agua y amoníaco (10:10:10:10:10:2).

Preparar una solución muestra que contenga 20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml, correspondientes al 0,25; 0,5 y 1% respectivamente, empleando en todos los casos agua como solvente.

Aplicar por separado 3 ml de cada una de las soluciones sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con gel de sílice 60 para cromatografia de 0,2 mm de espesor y desarrollar los cromatogramas en una cámara sin saturación.

Realizar la estimación visual de las manchas secundarias de la muestra contra las manchas de las soluciones diluidas. Ninguna de las manchas secundarias debe ser mayor a 1% y la suma de todas ellas no debe ser mayor a 3%.

Contenido de colorante total -

Titulación con TiCI₃ - Método I. Cada mililitro de TiCI₃ 0,1 N equivale a 0,02511 g de C₁₈H₁₄N₂O₈S₂Na₂. Contiene no menos de 85,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 499 nm. Contiene no menos de 85,0%.

TARTRAZINA (CI 19140)

C₁₆H₉N₄Na₃O₉S₂ PM:534,4

Definición - La Tartrazina es esencialmente la sal trisódica del ácido 5-hidroxi-1-(4-sulfonatofenil)-(4- sulfofenilazo)-pirazol-3-carboxílico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y/o sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color anaranjado. Expuesto a la luz ultravioleta presenta fluorescencia anaranjada intensa. Soluble en agua, moderadamente soluble en alcohol.

Identificación cromatogrática - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,29.

Sistema B: R_f aproximadamente 0,24.

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,02 mg por ml en el visible presenta un máximo a 426 nm y en el ultravioleta presenta un máximo a 258 nm y mínimos a 224 y 313 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Contenido de colorante total -

Tilulación con TiCl₃ - Método III. Cada mililitro de TiCI₃ 0,1 N equivale a 0,01336 g de C₁₆H₉N₄Na₂O₉S₂. Contiene no menos de 85,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 426 nm. Contiene no menos de 85,0%.

VERDE S (Cl 44090)

Definición - El Verde S es esencialmente la sal sódica del ácido 5-[4-dimetilamino-a-[4-dimetiliminiociDohexa- 2,5-dienililideno)bencil]-6-hidroxi-7-sulfonaftaleno-2-sulfónico y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y de sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color marrón oscuro. Expuesto a la luz ultravioleta presenta color pardo violáceo oscuro. Soluble en agua; poco soluble en etanol.

ldentifcación cromatográfica - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,61.

Sistema C: R_f aproximadamente 0,07 (aplicar 50 ml en forma de banda).

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,007 mg por ml en el visible presenta un máximo a 635 mn y mínimos a 357 y 498 nm; y en el ultravioleta presenta máximos a 239 y 304 nm y un mínimo a 272 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 20%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más de 0,2%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Valoración del colorante total -

Titulación con -TiCI₃ - Método III. Cada mililitro de TiCl₃ 0,1 N equivale a 0,02883 g de C₂₇H₂₅N₂O₇S₂Na. Contiene no menos de 80,0%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,007 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 635 nm. Contiene no menos de 80,0%.

VERDE SOLIDO FCF (Cl 42053)

Definición - El Verde sólido FCF es esencialmente la sal disódica del ácido N-etil-N-[4-[[4-[etil-[(3-sulfofenil)metil]amino]fenil](4hidroxi-2-sulfofenil)metileno]-2,5-ciclohexadien-l-iliden]-3 sulfobenzometanamina, isómeros y colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales componentes incoloros.

Caracteres generales - Polvo homogéneo o gránulos de color verde azulado. Expuesto a la luz ultravioleta presenta fluorescencia color verde. Soluble en agua; moderadamente soluble en etanol.

Identificación cromatográfca - (ver Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis).

Sistema A: R_f aproximadamente 0,61.

Sistema C: R_f aproximadamente 0,02 (aplicar 50 ml en forma de banda).

Identificación espectrofotométrica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,006 mg por ml en el visible presenta máximos a 420 y 625 nm y un mínimo a 485 nm; y en el ultravioleta presenta un máximo a 302 nm, un mínimo entre 247 y 269 nm y otro a 356 nm.

Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato (calculados como sales sódicas) no es mayor de 15%.

Materia insoluble en agua - No más de 0,2%.

Extracto etéreo - No más, de 0,4%.

Plomo <600> - No más de 20 ppm.

Arsénico <540> - No más de 2 ppm.

Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las soluciones de la luz. Proceder rápidamente empleando luz tenue o materiales de vidrio inactínico].

Emplear una fase móvil constituida por una mezcla de acetonitrilo, alcohol isoamílico, metiletilcetona, agua y amoníaco (50:50:15:10:5).

Preparar una solución muestra que contenga 20 mg por ml y una solución diluida que corresponda al 6% de la muestra (1,2 mg por ml) que será empleada como estándar, empleando en ambos casos metanol como solvente.

Aplicar en banda 50 ml de la solución muestra sobre una placa para cromatografía en capa delgada recubierta con gel de sílice 60 para cromatografía de 0,2 mm de espesor, reservando en la placa el espacio correspondiente a dos siembras para una posterior aplicación del estándar y realización del blanco. Desarrollar los cromatogramas en una cámara sin revestimiento interno y saturada durante 20 minutos. Retirar la placa de la cámara, secarla al reparo de la luz y repetir el desarrollo empleando la misma fase móvil.

Dejar secar la placa al reparo de la luz y aplicar en banda 50 ml de la solución estándar.

En tres erlenmeyer de 50 ml con tapón de vidrio esmerilado, colocar el raspado de las manchas secundarias de la muestra (excluyendo la mancha correspondiente al origen de siembra y la mancha inmediata superior a la principal), el raspado del estándar y un blanco constituido por el raspado de un sector limpio del cromatograma. Las tres áreas raspadas deben ser aproximadamente iguales.

A cada erlenmeyer agregar 6 ml de una mezcla de acetona y agua (1:1) y agitar durante 2 ó 3 minutos.

Luego agregar 18 ml de una solución de bicarbonato de sodio 0,05 M y volver agitar.

Recolectar cada solución con una jeringa de 50 ml, filtrar por medio de un cabezal de filtración con membrana de celulosa regenerada de 13 mm de diámetro y 0,45 mm de porosidad.

Determinar la absorbancia de la solución muestra y de la solución estándar a 630 nm, empleando la solución blanco como referencia. Calcular el porcentaje total de colorantes subsidiarios por la fórmula siguiente:

en la cual A_M es la absorbancia de la solución muestra y A_E la absorbancia de la solución estándar. El porcentaje total de colorantes subsidiarios no debe ser mayor a 6%.

Contenido de colorante total -

Tilulación con TiCI₃ - Método III. Cada mililitro de TiCl₃ 0,1 N equivale a 0,0404 g de C₃₇H₃₄N₂Na₂O₁₀S₃. Contiene no menos de 85%.

Valoración espectrofotométrica -

Concentración: 0,006 mg por ml. Determinar la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente a 625 nm. Contiene no menos de 85,0%.