Todos los reactivos empleados en este ensayo deben tener un contenido de metales pesados tan bajo como sea posible. El material de vidrio debe lavarse cuidadosamente, primero con una solución de ácido nítrico al 50% a una temperatura entre 35 y 55°C y finalmente con agua. El lubricante empleado en el robinete de la ampolla de decantación no debe ser soluble en cloroformo.

Solución alcalina de citrato de amonio - Disolver 50 g de citrato dibásico de amonio en cantidad suficiente de agua hasta completar 100 ml. Agregar 100 ml de amoníaco y separar los metales pesados que pudieran estar presentes, extrayendo la solución con porciones de 20 ml de Solución de ditizona para extracción (ver 600. Límite de plomo), hasta que esta solución conserve su color anaranjado verdoso. Extraer la ditizona que quede en la solución de citrato por agitación con cloroformo.

Cloroformo - Destilar cloroformo en un aparato de vidrio y recolectar el destilado en cantidad suficiente de alcohol absoluto de modo que la concentración final sea de 1 ml de alcohol por cada 100 ml de destilado.

Solución de ditizona - Solución estándar de ditizona (ver 600. Límite de plomo) preparada con Cloroformo destilado.

Solución estándar de cinc - Disolver 625 mg de óxido de cinc, previamente sometido a ignición moderada, hasta peso constante y exactamente pesado, en 10 ml de ácido nítrico y diluir con agua a 500,0 ml. Cada mililitro de esta solución contiene 1,0 mg de cinc.

Solución estándar de cinc diluida - A 1 ml de Solución estándar de cinc, exactamente medido, agregar dos gotas de ácido nítrico y diluir con agua a 100 ml. Cada mililitro de esta solución contiene 10 mg de cinc. Esta solución debe emplearse dentro de las 2 semanas de preparada.

Solución de ácido tricloroacético - Disolver 100 g de ácido tricloroacético en cantidad suficiente de agua y diluir a 1 litro.

Procedimiento - Transferir entre 1 y 5 ml de la preparación a ensayar, exactamente medidos, a un tubo de centrífuga graduado de 40 ml y, si fuera necesario, agregar ácido clorhídrico 0,2 N, gota a gota, hasta obtener una solución transparente. Agregar 5 ml de Solución de ácido tricloroacético y completar con. agua 40,0 ml. Mezclar y centrifugar.

Transferir un volumen exactamente medido del líquido sobrenadante, que contiene aproximadamepte entre 5 y 20 mg de cinc, a una ampolla de decantación de vidrio y agregar agua hasta completar 20 ml. Agregar 1,5 ml de Solución alcalina de citrato de amonio y 35 ml de Solución de ditizona (ver 600. Límite de plomo). Agitar vigorosamente unas cien veces, dejar que se separe la fase clorofórmica e insertar una torunda de algodón en el vástago de la ampolla de decantación para eliminar el agua que se haya emulsionado con el cloroformo. Recolectar el extracto clorofórmico (desechando la primera porción) en un tubo de ensayo y determinar la absorbancia a 530 nm, empleando un espectrofotómetro apropiado.

Calcular la cantidad de cinc contenida en la muestra, a partir de una curva de absorbancia en función de concentración, obtenida empleando 0,5; 1,0 y 1,5 ml de Solución estándar de cinc diluida y, en caso que el contenido de la muestra sea mayor de 15 mg, emplear 2,0 ml de Solución . estándar de cinc diluida, corregida mediante un blanco preparado simultáneamente con todos los reactivos empleados en las mismas proporciones, pero sin agregar cinc.