El siguiente ensayo se emplea para identificar sustancias pertenecientes al grupo de las tetraciclinas. A menos que se especifique de otro modo en la monografía correspondiente, emplear el Método I.

Solución estándar - A menos que se especifique de otro modo en la monografía correspondiente, disolver y diluir la Sustancia de referencia correspondiente a la sustancia a identificar con el mismo solvente especificado para la Solución muestra, para obtener una solución con una concentración similar a la obtenida para la Solución muestra.

Solución muestra - Proceder según se especifica en la monografía correspondiente.

Fase estacionaria - Emplear una placa para cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) recubierta con gel de sílice octilsilanizado con indicador (de fluorescencia de 0,25 mm de espesor. Activar la placa por calentamiento a 130°C durante 20 minutos, dejar enfriar y emplearla mientras esté tibia.

Fase móvil - Acido oxálico 0,5 M, previamente ajustado a pH 2,0 con hidróxido de amonio, acetonitrilo y metanol (80:20:20).

Solución de resolución - A menos que se especifique de otro modo en la monografía correspondiente, preparar una solución en metanol que contenga 0,5 mg de Clorhidrato de Clortetraciclina SR-FA, Hiclato de Doxiciclina SR-FA, Oxitetraciclina SR-FA y Clorhidrato de Tetraciclina SR-FA por ml.

Procedimiento - Aplicar por separado sobre la placa 1 ml de la Solución estándar, Solución muestra y Solución de resolución. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el frente del solvente haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el frente del solvente y dejarla secar al aire. Exponer la placa a vapores de amoníaco durante 5 minutos e inmediatamente examinar bajo luz ultravioleta a 366 mm: el cromatograma de la Solución de resolución debe presentar manchas separadas y la mancha principal obtenida a partir de la Solución muestra debe ser similar en intensidad, apariencia y valor de Rf a la obtenida a partir de la Solución estándar.

Solución reguladora de pH 3,5 - Disolver 13,4 g de ácido cítrico anhidro y 16,3 g de fósfato dibásico de sodio en 1 litro de agua y mezclar.

Fase estacionaria - Emplear un papel para cromatografía de 20 cm x 20 cm (Whatman N° 1 o equivalente). Impregnar la hoja con Solución reguladora de pH 3,5 y eliminar el exceso del solvente presionando firmemente la hoja entre dos papeles secantes no fluorescentes.

Fase móvil - Nitrometano, cloroformo y piridina (20:10:3). Emplear esta mezcla el mismo día de preparada.

Solución mezcla - Solución estándar y Solución muestra (50:50).

Procedimiento - En una cámara para cromatografía ascendente (ver 100. Cromatografía), colocar la Fase móvil hasta una altura de 0,6 cm. Sobre la línea de siembra en la hoja de papel y con una separación de 1,5 cm, aplicar 2 ml de la Solución estándar, Solución muestra y Solución mezcla. Antes de que las aplicaciones se sequen completamente, colocar el papel en la cámara cromatográfica de manera que el borde inferior se introduzca en la Fase móvil. Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente del solvente haya recorrido aproximadamente 10 cm, retirar la hoja de la cámara, marcar el frente del solvente y exponerla a vapores de amoníaco. Examinar bajo luz ultravioleta a 366 nm y visualizar la posición de las manchas amarillas principales: el valor del Rf de la mancha principal obtenida a partir de la Solución muestra y la Solución mezcla debe ser similar al obtenido a partir de la Solución estándar.