El perfil de impurezas de un producto se determina mediante la realización de este ensayo. La información general necesaria sobre cromatografía en placa delgada esta contenida en 100. Cromatografía. A menos que se especifique de otro modo en la monografía correspondiente emplear el siguiente ensayo.

Fase estacionaria - Emplear una placa para cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromalografía) recubierta con gel de sílice para cromatografía con indicador de fluorescencia de 0,25 mm de espesor.

Fase móvil - Emplear la fase móvil especificada en la monografía correspondiente.

Soluciones estándar - Preparar, empleando el solvente especificado en la monografía correspondiente, soluciones de la Sustancia de referencia o de la sustancia indicada, de concentraciones exactamente conocidas, iguales a 0,01; 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml. [NOTA: puede emplearse calentamiento o sonicación para favorecer la disolución cuando esto no afecte a la Sustancia de referencia.]

Solución muestra - Preparar, empleando el solvente especificado en la monografía correspondiente, una solución que contenga una concentración final de aproximadamente 10 mg por ml. [NOTA: se puede emplear calentamiento o sonicación para favorecer la disolución cuando esto no afecte a los componentes de la muestra.]

Procedimiento - Aplicar por separado sobre la placa volúmenes iguales (aproximadamente 20 ml) de la Solución muestra y las Soluciones estándar. Secar las aplicaciones bajo una corriente de nitrógeno y desarrollar los cromatogramas hasta que el frente del solvente haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar al aire. Examinar la placa empleando el Revelador especificado. Localizar las manchas, con excepción de la mancha principal en el cromatograma de la Solución muestra, y determinar sus intensidades relativas comparando con los cromatogramas de las Soluciones estándar correspondientes. El total de impurezas comunes no debe ser mayor de 2,0%, a menos que se especifique de otro modo en la monografía correspondiente.

Reveladores -

1. Luz ultravioleta de 254 y 366 nm.

2. Iodoplatinato (SR).

3. A 10 ml de solución de ioduro de potasio al 40%, agregar 10 ml de solución de subnitrato de potasio al 1,7% en ácido acético diluido (1 en 5). Completar a 100 ml con ácido sulfúrico diluido (1 en 10). A 30 ml de la solución resultante, agregar 2 g de iodo. Agitar enérgicamente hasta disolución completa. Mantener esta solución al abrigo de la luz.

4. Solución de ninhidrina para pulverizado - Disolver 200 mg de ninhidrina en 100 ml de alcohol. Calentar la placa luego de pulverizar sobre ésta.

5. Solución ácida para pulverizado - A 90 ml de alcohol, en un baño de hielo, agregar lentamente y con cuidado, agitando constantemente, 10 ml de ácido sulfúrico. Pulverizar sobre la placa y calentar hasta carbonizar.

6. Solución de dicromato ácido para pulverizado - A 100 ml de ácido sulfúrico, agregar dicromato de potasio, en cantidad suficiente, para obtener una solución saturada. Pulverizar sobre la placa y calentar hasta carbonizar.

7. Vainillina - Disolver 1 g de vainillina en 100 ml de ácido sulfúrico.

8. Cloramina T-Acido tricloroacético - Mezclar 10 ml de una solución acuosa de cloramina T al 3 % con 40 ml de una solución alcohólica de ácido tricloroacético al 25%. Preparar inmediatamente antes de usar.

9. Folin C - A 70 ml de agua agregar 10 g de tungstato de sodio y 2,5 g de molibdato de sodio. Agregar 5 ml de ácido fosfórico al 85% y 10 ml de ácido clorhídrico al 36%, calentar a reflujo esta solución durante 10 horas.

10. Permanganato de potasio (KMnO₄ - Disolver 100 mg de permanganato de potasio en 100 ml de agua.

11. DAB - Mezclar 1 g de p-dimetilaminobenzaldehído en 100 ml de ácido clorhídrico 0,6 N.

12. DAC - Mezclar 100 mg de p-dimetilaminocinamaldehído en 100 ml de ácido clorhídrico 1 N.

13. Ferricianuro - Mezclar cloruro férrico al 1% y ferricianuro de potasio al 1% (50:50). Emplear inmediatamente.

14. Fast Blue B -

Reactivo A - Disolver 500 mg de Sal de Fast Blue B en 100 ml de agua.

Reactivo B - Hidróxido de sodio 0,1 N. Pulverizar sobre la placa primero con activo A y luego con reactivo B.

15. Cianuro férrico alcalino - Diluir 1,5 ml de una solución de ferricianuro de potasio al 1% con agua a 20 ml y agregar 10 ml de solución de hidróxido de sodio al 15%.

16. Solución de iodo para pulverizado - Preparar una solución de iodo al 0,5% en cloroformo.

17. Exponer la placa durante 10 minutos a vapores de iodo en una cámara cerrada que en el fondo contiene cristales de iodo.

Solución A - Disolver 0,5 g de ioduro de potasio en 50 ml de agua.

Solución B - Preparar una solución de 0,5 g de almidón soluble en 50 ml de agua caliente.

Pulverizar sobre la placa con una mezcla de volúmenes iguales de Solución A y Solución B.

19. PTS - Disolver 20 g de ácido p-toluensulfónico en 100 ml de alcohol. Pulverizar sobre la placa, secar durante 15 minutos a 110 °C y examinar bajo luz ultravioleta a 366 nm.

20. Solución de o-toluidina para pulverizado - Disolver 160 mg de o-toluidina en 30 ml de ácido acético glacial, diluir con agua a 500 ml. Agregar 1 g de ioduro de potasio y mezclar hasta disolución completa.

21. Mezclar 3 ml de solución de ácido cloroplatínico (1 en 10) con 97 ml de agua. Agregar 100 ml de solución de ioduro de potasio (6 en 100).

22. Solución de iodo-metanol para pulverizado - Mezclar iodo (SR) y metanol (1:1).

23. Solución A: mezclar cuidadosamente 100 ml de solución de oxido de mercurio al 5% con 20 ml de ácido sulfúrico. Diluir a 250 ml con agua.

Solución B: solución de difenil carbazona al 0,1%. Esta solución se debe preparar en el día de su uso o debe ser mantenida bajo refrigeración por no más de 20 días. Pulverizar en forma sucesiva, sobre la placa, primero con Solución A y luego con Solución B.